【用法與判定】
1 用法
1.1 樣品處理及模板準備
推薦采用廣州悅洋生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的病毒 DNA/RNA 提取試劑盒,按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。
1.2 熒光 PCR 擴增
開(kāi)機預熱并檢驗儀器性能后,取PCR 反應管分別加入5 微升提取好的核酸和陰陽(yáng)對照,標記后
放置在熒光PCR 樣品槽相應位置,記錄順序,按下表2 設置擴增參數,進(jìn)行PCR 擴增。
2 判定
2.1 合理調整閾值線(xiàn),不同儀器可根據儀器噪音情況進(jìn)行調整。
2.2 試劑盒有效性判定
·陰性對照:無(wú)Ct 值,線(xiàn)形為直線(xiàn)或微斜,無(wú)明顯指數增長(cháng)。
·陽(yáng)性對照:FAM(貓皰疹 1 型病毒)和 HEX(貓杯狀病毒)通道Ct 值≤30,有明顯指數增長(cháng),呈典型的S 型曲線(xiàn)。
2.3 樣本結果判定
陽(yáng)性:檢測通道 Ct 值≤38,且曲線(xiàn)有明顯的指數增長(cháng)曲線(xiàn)。
可疑:檢測通道 38<Ct 值≤40 ,建議重復試驗,重復試驗結果仍為 38<Ct 值≤40 和明顯擴增曲線(xiàn)者為陽(yáng)性,否則為陰性。
陰性:樣本檢測結果無(wú) Ct 值且無(wú)明顯的擴增曲線(xiàn)。
(更詳細資料請參照說(shuō)明書(shū))